分子生物学实验理论与操作教程
目 录
前 言-----------------------------------------------------------I
一部分 核酸提取----------------------------------------------1
实验一:基因组DNA提取--------------------------------------------1
实验二:总RNA提取------------------------------------------------3
二部分 亚克隆技术---------------------------------------------8
实验三:质粒DNA提取----------------------------------------------8
实验四:DNA片段的酶切--------------------------------------------9
实验五:DNA片段的酶修饰-脱磷-------------------------------------12
实验六:DNA片段的连接--------------------------------------------13
实验七: DNA片段的回收-------------------------------------------15
三部分 PCR技术-----------------------------------------------18
实验八:PCR产物的克隆技术----------------------------------------18
八.1:T-载体构建 ---------------------------------------------19
八.2:PCR产物的T-载体克隆------------------------------------20
八.3:PCR产物的平端克隆技术----------------------------------21
实验九:RT-PCR技术-----------------------------------------------21
实验十:定量PCR -------------------------------------------------25
四部分 文库构建技术------------------------------------------29
实验十一:mRNA的提取及纯化 --------------------------------------29
实验十二:cDNA文库构建技术- cDNA 链的反转合成--------------------32
实验十三:1,cDNA文库构建技术- cDNA 链的连接、包装及转染----------34
实验十三:2,RACE技术---------------------------------------------36
五部分 核酸杂交技术-------------------------------------------40
实验十四:DNA探针的标记------------------------------------------40
实验十五:Southern杂交技术---------------------------------------44
六部分:基因及基因产物检测技术----------------------------------48
实验十六:DNA的测序技术------------------------------------------48
实验十七:基因表达 1,基因的体外快速翻译-------------------------53
2,基因的诱导表达-----------------------------54
实验十八:报告基因的应用------------------------------------------57
实验十九:Western杂交技术----------------------------------------58
七部分 基因表达轮廓技术---------------------------------------67
实验二十:DD-PCR技术---------------------------------------------73
实验二一:SSH技术------------------------------------------------74
八部分:遗传转化技术-------------------------------------------75
实验二二:感受态细胞制备-----------------------------------------75
实验二三:重组基因的转化及筛选------------------------------------77
实验二四:原生质体分离--------------------------------------------78
实验二五:农杆菌转化技术------------------------------------------79
九部分:分子标记技术--------------------------------------------80
实验二六:RFLP技术-----------------------------------------------86
实验二七:RAPD技术-----------------------------------------------86
实验二八:AFLP技术-----------------------------------------------87
实验二九:SSR技术------------------------------------------------89
十部分:细胞技术-----------------------------------------------89
实验三十:细胞凋亡------------------------------------------------89
十一:附录 一----------------------------------------------------92
二-----------------------------------------------------96
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